calsyntenin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425768

Panoramica

Clstn1 codifica la calsintenina-1, una proteina di membrana di tipo I arricchita nei neuroni che funge da adattatore di carico, collegando le vescicole ai motori chinesinici e coordinando il trasporto anterogrado in assoni e dendriti. Attraverso interazioni con la proteina precursore dell’amiloide (APP), componenti sinaptiche e i macchinari del traffico endosomiale, la calsintenina-1 contribuisce alla formazione delle sinapsi, al traffico dei recettori e alla connettività neuronale dipendente dall’attività. L’alterazione del trasporto dipendente da CLSTN1 e dell’omeostasi sinaptica è stata studiata nel contesto dei meccanismi di malattie neurosviluppative e neurodegenerative, incluse vie implicate nel processamento di APP correlato alla malattia di Alzheimer. Nei modelli murini, Clstn1 viene spesso indagato per comprendere come il trasporto intracellulare a lunga distanza modelli l’assemblaggio dei circuiti, la plasticità sinaptica e la vulnerabilità neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO calsyntenin-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Clstn1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Clstn1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Clstn1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina calsyntenin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Clstn1 per lo studio della segnalazione di calsyntenin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Clstn1 critici per la funzione di calsyntenin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Clstn1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal calsyntenin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal calsyntenin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Clstn1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal calsyntenin-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR calsyntenin-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Clstn1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Clstn1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.