calsyntenin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425768

Visão geral

Clstn1 codifica a calsintenina-1, uma proteína de membrana do tipo I enriquecida em neurônios que atua como adaptadora de carga, ligando vesículas a motores de cinesina e coordenando o transporte anterógrado em axônios e dendritos. Por meio de interações com a proteína precursora do amiloide (APP), componentes sinápticos e a maquinaria de tráfego endossomal, a calsintenina-1 contribui para a formação de sinapses, o tráfego de receptores e a conectividade neuronal dependente de atividade. A perturbação do transporte dependente de CLSTN1 e da homeostase sináptica tem sido estudada no contexto de mecanismos de doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas, incluindo vias implicadas no processamento de APP relacionado à doença de Alzheimer. Em sistemas murinos, Clstn1 é frequentemente investigado para compreender como o transporte intracelular de longa distância molda a montagem de circuitos, a plasticidade sináptica e a vulnerabilidade neuronal.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO calsyntenin-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Clstn1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Clstn1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Clstn1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína calsyntenin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Clstn1 para a investigação da sinalização de calsyntenin-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Clstn1 críticos para a função calsyntenin-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Clstn1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo calsyntenin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo calsyntenin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Clstn1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo calsyntenin-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR calsyntenin-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Clstn1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Clstn1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.