Partículas Lentivirales de Activación (m) cadherin-26: sc-436285-LAC

Cdh26 codifica la cadherina-26, un receptor de adhesión célula–célula dependiente de calcio de la superfamilia de las cadherinas que contribuye a la organización epitelial, la integridad de las uniones y las propiedades de barrera específicas de cada tejido en el ratón. Al mediar la adhesión homofílica y conectarse con el citoesqueleto de actina a través de complejos asociados a cateninas, la cadherina-26 puede influir en la señalización dependiente del contacto, la polaridad celular y los procesos de remodelación relevantes para la inflamación y la homeostasis tisular. La expresión desregulada de cadherinas y la alteración de las uniones se asocian con frecuencia a cambios en la diferenciación epitelial y en las interacciones con células inmunitarias, lo que convierte a Cdh26 en un punto de partida útil para estudiar la regulación dependiente de la adhesión en la biología de mucosas y de las vías aéreas. Estos mecanismos se exploran a menudo en modelos de fenotipos inflamatorios y de remodelación, donde la cohesión epitelial y el diálogo cruzado de señalización afectan a vías relevantes para la enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral cadherin-26 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Cdh26 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral cadherin-26 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Cdh26, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de cadherin-26. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Cdh26 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.