CA XIV Double Nickaseプラスミド (h): sc-404085-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CA XIV Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CA XIVダブルニカースプラスミド（h）およびCA XIVダブルニカースプラスミド（h2）は、CA14を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CA XIV 抗体 (A-4): sc-166438
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CA XIV Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404085-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CA XIV Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404085-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのCA14は、膜に係留された亜鉛メタロ酵素である炭酸脱水酵素XIV（CA XIV）をコードしており、CO₂の可逆的な水和反応（重炭酸イオンとプロトンへの変換）を触媒することで、細胞外pHの制御や重炭酸輸送を支えています。CA XIVはイオン輸送体や緩衝系と連携することで、代謝フラックス、上皮の生理機能、神経の興奮性を左右する酸塩基恒常性の維持に寄与します。CA14の発現およびCA XIVの活性は、細胞間シグナル伝達や、腫瘍生物学や組織リモデリングに関わる微小環境の酸性化など、精密なpH調節に依存する過程と関連づけられてきました。そのため、炭酸脱水酵素活性の制御異常は、神経疾患や上皮性疾患、ならびにがんで観察されるpHダイナミクスの変化との関連で研究されています。
CA XIV ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CA14 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CA14内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CA14の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CA14が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。