CA VI Double Nickaseプラスミド (h): sc-405565-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CA VI Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CA VIダブルニカースプラスミド（h）およびCA VIダブルニカースプラスミド（h2）は、CA6を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CA VI 抗体 (F-12): sc-166679
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CA VI Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405565-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CA VI Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405565-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
炭酸脱水酵素VI（CA VI）は、ヒトのCA6遺伝子にコードされる分泌型の亜鉛メタロ酵素で、CO₂の可逆的な水和反応により重炭酸イオンとプロトンを生成し、唾液やその他の腺分泌液における細胞外pHの恒常性維持および緩衝能に寄与します。局所の酸塩基バランスを調節することで、CA VIは粘膜表面の化学環境、エナメル質の脱灰／再石灰化の動態、ならびに宿主—マイクロバイオーム相互作用を形作る微小環境条件に関連するプロセスに影響を与えます。CA6の発現変化やCA VI活性の変動は、唾液の緩衝能やpH依存的な組織変化への感受性など、口腔の生理学的特性の差異と関連づけられており、分泌腺機能や上皮の恒常性を反映する分子指標として有用であることが示唆されます。これらの特性により、CA6は細胞外炭酸脱水酵素の生物学、pH制御シグナル伝達、ならびにバリア近傍の微小環境における分泌酵素の寄与を機構的に研究するうえで、重要な標的となります。
CA VI ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CA6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CA6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CA6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CA6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。