C11orf51 Double Nickase Plasmid (h): sc-407279-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das C11orf51 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- C11orf51 Double-Nickase-Plasmid (h) und C11orf51 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ANAPC15 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
C11orf51 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407279-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C11orf51 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407279-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANAPC15 (auch als C11orf51 annotiert) kodiert eine kleine regulatorische Untereinheit des anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C), einer E3-Ubiquitin-Ligase, die das geordnete Fortschreiten durch Mitose und G1 koordiniert, indem sie zentrale Zellzyklus-Regulatoren für den proteasomalen Abbau markiert. Über die APC/C-abhängige Ubiquitinierung trägt ANAPC15 zur Checkpoint-Kontrolle, zum rechtzeitigen Eintritt in die Anaphase und zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität bei. Eine Fehlregulation der Zusammensetzung oder Aktivität des APC/C wird breit mit Phänotypen chromosomaler Instabilität in Verbindung gebracht, die für proliferative Erkrankungen und die Krebsbiologie relevant sind, wodurch ANAPC15 ein nützliches Ziel zur Aufklärung von Mechanismen der mitotischen Kontrolle darstellt. In humanen Zellen bietet eine Störung von ANAPC15 einen gut handhabbaren Ansatzpunkt, um Ubiquitin-Proteasom-Signalwege, Dynamiken des Spindel-Checkpoints und das Timing des Zellzyklus zu untersuchen.
C11orf51 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ANAPC15-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ANAPC15 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ANAPC15-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ANAPC15-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.