Particules Lentivirales d'Activation (h) BRD9: sc-404933-LAC

BRD9 (bromodomain containing 9) est un lecteur de la chromatine qui reconnaît les résidus de lysine acétylée sur les histones et contribue à la régulation épigénétique de la transcription. Dans les cellules humaines, BRD9 agit comme un composant central du complexe non canonique de remodelage de la chromatine SWI/SNF de type BAF (ncBAF/GBAF), en influençant l’activité des enhancers, l’accessibilité des promoteurs et des programmes géniques spécifiques de lignée. Par ses interactions dépendantes de son bromodomaine, BRD9 aide à coordonner des réponses transcriptionnelles liées au contrôle du cycle cellulaire, à la différenciation et à la dynamique de la chromatine associée aux dommages de l’ADN. Une activité dérégulée de BRD9 et la signalisation ncBAF ont été étudiées dans le contexte de dépendances transcriptionnelles oncogéniques et d’états de chromatine aberrants dans plusieurs modèles de cancers.

Les particules d'activation lentivirales BRD9 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BRD9 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BRD9 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BRD9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BRD9. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BRD9 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.