Partículas Lentivirales de Activación (h) BRCA2: sc-400700-LAC

BRCA2 codifica un supresor tumoral central que salvaguarda la integridad del genoma al coordinar la reparación de alta fidelidad de las roturas de doble cadena del ADN mediante recombinación homóloga. BRCA2 favorece la formación de filamentos de RAD51 y regula la protección de la horquilla de replicación, lo que la vincula con la señalización de la respuesta al daño del ADN, el control del punto de control de la fase S y el mantenimiento de la estabilidad cromosómica. La alteración o desregulación de la función de BRCA2 se asocia estrechamente con la susceptibilidad a cánceres hereditarios y esporádicos, lo que refleja su papel en la prevención de la acumulación de mutaciones y de la recombinación aberrante. Por ello, BRCA2 se estudia ampliamente en vías que gobiernan el estrés replicativo, la reparación mediada por recombinación y fenotipos de mantenimiento del genoma relevantes para la transformación oncogénica.

Las partículas de activación lentiviral BRCA2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BRCA2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BRCA2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BRCA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BRCA2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BRCA2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.