Bok CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407699

概要

BOK（BCL2-related ovarian killer）は、BCL-2タンパク質ファミリーに属するアポトーシス促進因子Bokをコードしており、ミトコンドリア外膜透過化およびそれに続くカスパーゼ活性化に影響を与えることで、内因性アポトーシスに寄与します。Bokは小胞体およびミトコンドリア関連膜（MAM）の生物学とも関連づけられており、プロテオスタシスと細胞運命の決定を統合するストレス応答経路と交差します。これらの役割を通じてBOKは、アポトーシスの閾値や細胞のストレス感受性が変化する状況、すなわちがん生物学、神経変性に伴うストレスシグナル伝達、組織恒常性などの文脈で研究されています。他のBCL-2ファミリータンパク質との制御機構や機能的な重なりがあることから、経路の冗長性やアポトーシスのプライミングを解析するうえで有用な結節点（ノード）となります。

Bok CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBOK遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BOK内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BOKのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Bokタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Bokシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BOK欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Bokの機能に不可欠なBOKエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BOKゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Bok CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBok CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BOK遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Bok HDRプラスミド（h）および Bok HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBOKホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBOK標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。