Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bmi-1: sc-417606-ACT

BMI1 code la protéine du groupe Polycomb Bmi-1, un composant central du complexe répressif Polycomb 1 (PRC1), qui maintient le silence épigénétique des gènes par compaction de la chromatine et ubiquitination de l’histone H2A. Bmi-1 régule des programmes transcriptionnels contrôlant l’auto-renouvellement, l’engagement de lignée et la progression du cycle cellulaire, notamment via la répression du locus CDKN2A/INK4A–ARF et la modulation des points de contrôle de la sénescence. Par ces fonctions, BMI1 influence les réponses aux dommages de l’ADN, la tolérance au stress oxydant et les phénotypes de type « stem » dans divers contextes cellulaires. Une activité de BMI1 dérégulée a été largement associée à des états transcriptionnels oncogéniques et à une différenciation altérée dans de multiples modèles pertinents pour les maladies, ce qui en fait une cible fréquente en recherche sur l’épigénétique et la biologie du cancer.

Bmi-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BMI1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bmi-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BMI1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BMI1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bmi-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BMI1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bmi-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bmi-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de BMI1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.