Plásmido CRISPR de Activación (h) BMCP1 (UCP5): sc-405051-ACT

SLC25A14 codifica BMCP1 (también conocido como UCP5), un transportador de la membrana interna mitocondrial que contribuye a una fuga de protones regulada y a la modulación de la eficiencia de la fosforilación oxidativa. Al influir en el potencial de membrana mitocondrial, la producción de especies reactivas de oxígeno y el acoplamiento del transporte de electrones a la síntesis de ATP, BMCP1 se integra en vías que controlan la homeostasis bioenergética, las respuestas al estrés y la dinámica mitocondrial. UCP5 está enriquecido en el sistema nervioso y se ha asociado con la resiliencia celular frente al estrés oxidativo y metabólico, lo que lo hace relevante para estudios de neurodegeneración y disfunción mitocondrial. La alteración de la expresión o la actividad de las proteínas desacoplantes también se utiliza como indicador en investigaciones sobre metabolismo, susceptibilidad a la apoptosis y control de calidad mitocondrial.

BMCP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC25A14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BMCP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC25A14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC25A14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BMCP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC25A14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BMCP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BMCP1 en células tumorales con expresión de SLC25A14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.