Partículas Lentivirales de Activación (m2) BMCP1: sc-422996-LAC-2

El gen murino Slc25a14 codifica la proteína transportadora mitocondrial cerebral 1 (BMCP1), un transportador de la membrana mitocondrial interna de la familia SLC25 implicado en la regulación de la fuga de protones y de la eficiencia del acoplamiento mitocondrial. La actividad de BMCP1 influye en la fosforilación oxidativa, el potencial de membrana, la producción de ATP y la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno, modulando así las respuestas de las neuronas y de los tejidos con alta actividad metabólica ante la demanda energética y el estrés. La alteración de la función de Slc25a14 se ha estudiado en el contexto de la disfunción mitocondrial y del desequilibrio redox, relevantes para la neurodegeneración y determinados fenotipos metabólicos. La edición génica de Slc25a14 en modelos de ratón respalda la investigación mecanística sobre la bioenergética mitocondrial, la señalización adaptativa al estrés y las relaciones genotipo–fenotipo en las vías de transportadores mitocondriales.

Las partículas de activación lentiviral BMCP1 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Slc25a14 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BMCP1 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Slc25a14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BMCP1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Slc25a14 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.