BimEL Plasmide Double Nickase (h): sc-400515-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BimEL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BimEL Double Nickase Plasmid (h) e il BimEL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BCL2L11. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BimEL Plasmide Double Nickase (h) | sc-400515-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BimEL Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400515-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCL2L11 codifica la proteina pro-apoptotica “BH3-only” Bim e l’isoforma Bim_EL è una variante di splicing ampiamente espressa che integra i segnali di stress cellulare per avviare la permeabilizzazione della membrana esterna mitocondriale. Bim_EL promuove l’apoptosi intrinseca neutralizzando i membri anti-apoptotici della famiglia BCL-2 e facilitando l’attivazione di BAX/BAK, collegando la privazione di fattori di crescita, lo stress del reticolo endoplasmatico e segnali del citoscheletro all’attivazione delle caspasi. La sua attività è regolata dal controllo trascrizionale (ad es. FOXO), dalla fosforilazione post-traduzionale (ad es. il turnover dipendente da MAPK/ERK) e dal sequestro nella rete dei microtubuli, collocando Bim_EL all’interfaccia tra vie di sopravvivenza e di morte cellulare. La disregolazione del “priming” apoptotico mediato da BCL2L11 è stata implicata nella sopravvivenza oncogenica, in difetti dell’omeostasi immunitaria e in risposte alterate allo stress cellulare, rendendolo un nodo chiave nella ricerca sull’apoptosi e sul destino cellulare.
BimEL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BCL2L11 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BCL2L11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BCL2L11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BCL2L11 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.