Plásmido Doble Nickase (h) BimEL: sc-400515-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BimEL consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BimEL (h) y el plásmido de doble nickasa BimEL (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BCL2L11. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BimEL | sc-400515-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BimEL | sc-400515-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCL2L11 codifica la proteína proapoptótica Bim, de tipo BH3-only, y la isoforma Bim_EL es una variante de empalme ampliamente expresada que integra señales de estrés celular para iniciar la permeabilización de la membrana externa mitocondrial. Bim_EL promueve la apoptosis intrínseca al neutralizar a miembros antiapoptóticos de la familia BCL-2 y facilitar la activación de BAX/BAK, conectando la retirada de factores de crecimiento, el estrés del RE y las señales del citoesqueleto con la activación de las caspasas. Su actividad está regulada por control transcripcional (p. ej., FOXO), fosforilación postraduccional (p. ej., recambio dependiente de MAPK/ERK) y secuestro en la red de microtúbulos, situando a Bim_EL en la interfaz entre las vías de supervivencia y de muerte. La desregulación del “priming” apoptótico mediado por BCL2L11 se ha implicado en la supervivencia oncogénica, defectos de la homeostasis inmunitaria y respuestas alteradas al estrés celular, lo que lo convierte en un nodo clave en la investigación sobre apoptosis y destino celular.
BimEL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BCL2L11 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BCL2L11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BCL2L11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BCL2L11 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.