Plásmido CRISPR de Activación (h) BICD1: sc-410704-ACT

BICD1 (homólogo 1 de bicaudal D) es una proteína adaptadora de tipo *coiled-coil* que conecta los motores de dineína–dinactina citoplasmáticos con su carga, coordinando el transporte sobre microtúbulos dirigido hacia el extremo menos. Contribuye al posicionamiento de vesículas y orgánulos, a la organización del aparato de Golgi y al tráfico asociado al centrosoma, apoyando procesos como la polaridad celular y la progresión mitótica. A través de su papel en las redes de tráfico intracelular, BICD1 puede influir en la dinámica de señalización al controlar el movimiento y la organización espacial de receptores y endosomas. La desregulación de la función de los adaptadores de dineína es ampliamente relevante para las respuestas celulares al estrés y para fenotipos observados en contextos de investigación neurodel desarrollo y neurodegenerativa.

BICD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BICD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BICD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BICD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BICD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BICD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BICD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BICD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BICD1 en células tumorales con expresión de BICD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.