BF-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402933-ACT

FOXG1 codifica o fator de transcrição humano brain factor-1 (BF-1), um regulador da família forkhead que controla a proliferação de progenitores telencefálicos e corticais, o momento da diferenciação neuronal e a padronização regional durante o neurodesenvolvimento. O BF-1 modula programas de expressão gênica ligados ao controle do ciclo celular e à especificação de linhagens neuronais, integrando-se a redes de sinalização como as saídas transcricionais dependentes de TGF-β/SMAD e de WNT/β-catenina. A desregulação da dosagem ou da função de FOXG1 perturba o equilíbrio excitatório–inibitório e o desenvolvimento sináptico, e variantes patogênicas estão associadas a transtornos do neurodesenvolvimento, incluindo a síndrome FOXG1 e fenótipos relacionados à epilepsia. Em modelos celulares, FOXG1 atua como um nó central para o estudo do controle transcricional dirigido pela cromatina, das decisões de destino celular e das trajetórias de maturação em células-tronco neurais e neurônios.

BF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BF-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BF-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BF-1 em células tumorais com expressão de FOXG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.