Partículas Lentivirales de Activación (m) Bex4: sc-436560-LAC

El gen Mouse brain expressed X-linked 4 (Bex4) codifica una proteína pequeña, enriquecida en neuronas, implicada en la regulación de la diferenciación neuronal, el crecimiento de neuritas y programas transcripcionales durante el desarrollo del SNC. Los miembros de la familia BEX se han relacionado con la señalización sensible a neurotrofinas y con redes de interacción proteína–proteína que influyen en la supervivencia celular, las respuestas al estrés y el control epigenético de la expresión génica. En el sistema nervioso, Bex4 se estudia en el contexto de la especificación de linaje y la plasticidad dependiente de la actividad, donde patrones de expresión alterados pueden reflejar cambios en el estado del desarrollo o estrés celular. Estas propiedades hacen de Bex4 un objetivo útil para desentrañar las vías subyacentes a fenotipos del neurodesarrollo y a la vulnerabilidad neuronal en modelos relevantes de enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral Bex4 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Bex4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Bex4 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Bex4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Bex4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Bex4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.