beta Actin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418965

Panoramica

Actb codifica la beta-actina del topo, una proteina citoscheletrica altamente conservata che polimerizza in microfilamenti per sostenere la forma cellulare, la polarità e la stabilità meccanica. La dinamica della beta-actina guida processi fondamentali, tra cui la citocinesi, il traffico vescicolare e la migrazione cellulare, attraverso la regolazione coordinata della nucleazione dell’actina, della ramificazione e del turnover in vie che coinvolgono le GTPasi della famiglia Rho e proteine leganti l’actina. Oltre ai ruoli strutturali, il rimodellamento dell’actina influenza programmi trascrizionali e la trasduzione del segnale modulando la meccanotrasduzione e i pool di actina nucleare. Un’organizzazione dell’actina deregolata è ampiamente implicata in modelli sperimentali di difetti dello sviluppo, riparazione delle ferite compromessa, alterazioni della motilità delle cellule immunitarie e invasione delle cellule tumorali, rendendo Actb un locus di riferimento chiave negli studi di biologia cellulare e dei meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO beta Actin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Actb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Actb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Actb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina beta Actin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Actb per lo studio della segnalazione di beta Actin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Actb critici per la funzione di beta Actin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Actb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal beta Actin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal beta Actin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Actb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal beta Actin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR beta Actin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Actb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Actb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.