Particules Lentivirales d'Activation (m) beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3: sc-419239-LAC

Atp1b3 code la sous-unité β3 de la Na⁺/K⁺‑ATPase, un complexe enzymatique essentiel de la membrane plasmique qui maintient les gradients électrochimiques de Na⁺ et de K⁺ nécessaires au potentiel de membrane, à l’homéostasie osmotique et au transport actif secondaire. En soutenant les processus dépendants des ions, ATP1B3 influence l’excitabilité cellulaire, l’absorption des nutriments, la régulation du volume et des voies de signalisation liées à la polarité épithéliale et à l’activation des cellules immunitaires. Des altérations de la composition ou de l’expression des sous-unités de la Na⁺/K⁺‑ATPase ont été associées à une fonction barrière perturbée, à une signalisation inflammatoire aberrante et à des réponses au stress, pertinentes pour la biologie des maladies cardiovasculaires, neurologiques et métaboliques. Dans des modèles murins, la modulation de l’expression d’Atp1b3 permet d’analyser comment la machinerie de transport ionique coordonne la physiologie des tissus et les réponses aux lésions ou à l’inflammation.

Les particules d'activation lentivirales beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Atp1b3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Atp1b3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Atp1b3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.