Plasmide CRISPR d'Activation (h) BETA 3: sc-402142-ACT

BHLHE22 (également connu sous le nom de BETA 3) code un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) impliqué dans les programmes de différenciation et de maturation neuronales. Il contribue à des réseaux transcriptionnels qui façonnent la spécification du destin cellulaire, le développement des neurites et l’expression de gènes synaptiques, en s’intégrant aux signaux développementaux centraux et au contrôle de l’expression génique régulé par la chromatine. Une régulation altérée des facteurs de transcription bHLH est associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une formation dérégulée des circuits neuronaux, faisant de BHLHE22 un nœud utile pour étudier la répression/activation transcriptionnelle dépendante du contexte. Les applications en recherche incluent couramment la cartographie des cibles en aval, la définition d’éléments régulateurs spécifiques de types cellulaires et l’exploration de réseaux de régulation génique pertinents pour le développement cérébral et les mécanismes des maladies neurologiques.

BETA 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BHLHE22 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BETA 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BHLHE22 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BHLHE22, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BETA 3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BHLHE22 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BETA 3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BETA 3 dans les cellules tumorales présentant une expression de BHLHE22 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.