Plásmido CRISPR de Activación (h) beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1: sc-401093-ACT

ATP1B1 codifica la subunidad beta 1 de la Na⁺/K⁺-ATPasa, un complejo ATPasa de tipo P de la membrana plasmática que mantiene los gradientes electroquímicos acoplando la hidrólisis de ATP al transporte de Na⁺ y K⁺. Al sostener el potencial de membrana y el equilibrio osmótico, ATP1B1 influye en la polarización epitelial, la organización de las uniones estrechas y los procesos de transporte activo secundario que dependen de gradientes iónicos. La función de la Na⁺/K⁺-ATPasa se interconecta con vías de señalización, incluidas cascadas dependientes de Src y programas más amplios de respuesta al estrés que vinculan la homeostasis iónica con el crecimiento y la diferenciación. La desregulación de la expresión de ATP1B1 o del equilibrio de subunidades de la Na⁺/K⁺-ATPasa se ha asociado con alteraciones de la función de barrera y con fenotipos celulares relevantes para la biología renal, cardiovascular y del cáncer.

beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATP1B1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATP1B1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATP1B1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATP1B1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 en células tumorales con expresión de ATP1B1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.