BDP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422508

Panoramica

Ptpn18 codifica una fosfatasi tirosinica proteica implicata nella regolazione della segnalazione mediata dai recettori tirosin-chinasici (RTK) e delle vie a valle dipendenti dalla fosforilazione, che modulano crescita cellulare, adesione e motilità. Nelle cellule murine, PTPN18 è stata collegata alla modulazione della segnalazione di EGFR/della famiglia ErbB e di processi di traffico proteico che influenzano la durata del segnale e la sua organizzazione spaziale. Attraverso la defosforilazione di specifici substrati, PTPN18 può influire sugli output associati a MAPK e PI3K, integrando segnali che incidono sulla dinamica del citoscheletro e sulle risposte cellulari allo stress. Un’attività fosfatasica deregolata e un’alterata segnalazione RTK sono ampiamente associate a programmi di segnalazione oncogenici e a fenotipi infiammatori, rendendo Ptpn18 un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BDP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ptpn18 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ptpn18 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ptpn18 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BDP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ptpn18 per lo studio della segnalazione di BDP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ptpn18 critici per la funzione di BDP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ptpn18 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BDP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BDP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ptpn18. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BDP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BDP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ptpn18 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ptpn18 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.