Bcl-w Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402639-NIC

BCL2L2 codifica a proteína antiapoptótica da família Bcl-2, Bcl-w, um regulador da apoptose intrínseca localizado na membrana externa da mitocôndria, que restringe a liberação de citocromo c ao antagonizar proteínas pró-morte do tipo BH3-only e limitar a formação de poros por BAX/BAK. Ao controlar a integridade mitocondrial, a Bcl-w influencia os limiares de ativação de caspases e integra sinais de sobrevivência a jusante de respostas celulares ao estresse, privação de fatores de crescimento e perturbações metabólicas. A expressão alterada de BCL2L2 tem sido associada a programas desregulados de sobrevivência celular na biologia do câncer e também foi estudada em contextos como viabilidade neuronal e manutenção de células germinativas, nos quais a sensibilidade à apoptose molda a homeostase tecidual. Essas funções tornam o BCL2L2 um alvo útil para dissecar a circuitaria da apoptose mitocondrial, a adaptação ao estresse e a comunicação entre vias (cross-talk) com a sinalização MAPK e PI3K–AKT.

Bcl-w O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus BCL2L2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de BCL2L2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função BCL2L2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com BCL2L2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.