BCKDE1A Lentiviral Activation Particles (h): sc-417950-LAC

BCKDHA kodiert die E1α‑Untereinheit des mitochondrialen Dehydrogenasekomplexes für verzweigtkettige α‑Ketosäuren (BCKDH), einen zentralen enzymatischen Knotenpunkt im oxidativen Abbau der verzweigtkettigen Aminosäuren Leucin, Isoleucin und Valin. In der mitochondrialen Matrix verknüpft BCKDH den Aminosäureumsatz mit dem zentralen Kohlenstoffstoffwechsel, indem es Acyl‑CoA‑Derivate bildet, die nachgeschaltete energieerzeugende Stoffwechselwege speisen und die metabolische Homöostase unterstützen. Die Funktion von BCKDHA ist in kofaktorabhängige Prozesse der oxidativen Decarboxylierung sowie in die mitochondriale Qualitätskontrolle eingebettet, was es zu einem geeigneten Ansatzpunkt für Studien zur Nährstoffsensorik und zum mitochondrialen Stoffwechsel macht. Eine Störung oder Fehlregulation von BCKDHA ist mit einem beeinträchtigten Abbau verzweigtkettiger Aminosäuren assoziiert und ist relevant für angeborene Stoffwechselstörungen wie die Ahornsirupkrankheit (Maple Syrup Urine Disease).

BCKDE1A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente BCKDHA-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

BCKDE1A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der BCKDHA-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen BCKDE1A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen BCKDHA-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.