BCAP Lentiviral Activation Particles (m): sc-429913-LAC

Das murine Pik3ap1 kodiert den B‑Zell-Adapter für PI3K (BCAP), ein zytosolisches Signalgerüst, das Signale aus Antigenrezeptoren und angeborenen Immunrezeptoren mit der Aktivierung der Phosphoinositid‑3‑Kinase koppelt. BCAP trägt dazu bei, Signale des B‑Zell-Rezeptors, von TLRs und von Zytokinrezeptoren zu integrieren und dadurch die PI3K‑AKT-Signalübertragung, nachgeschaltete MAPK-Aktivität sowie Transkriptionsprogramme zu modulieren, die Proliferation, Überleben und Differenzierung prägen. In Immunzellen beeinflusst BCAP den Calciumfluss, die metabolische Umprogrammierung und die Zytoskelettdynamik, die Aktivierung und Migration unterstützen. Eine fehlregulierte PI3K-Signalgebung und eine veränderte Adapterfunktion sind relevant für Studien zu Entzündung, Autoimmunität und der Biologie hämatologischer Malignome, in denen Signal-Schwellenwerte und Entscheidungen über das Zellschicksal gestört sind.

BCAP Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Pik3ap1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

BCAP Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Pik3ap1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen BCAP-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Pik3ap1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.