Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
BBS4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403421
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BBS4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico BBS4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BBS4 Antibody (1292CT845.130.218): sc-517315
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BBS4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403421 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
BBS4 codifica una componente centrale del complesso BBSome, che coopera con il macchinario di trasporto intraflagellare per regolare l’assemblaggio del ciglio primario e il traffico delle proteine di membrana ciliare. Attraverso il suo ruolo nella competenza di segnalazione ciliare, BBS4 influenza vie quali Hedgehog e altri programmi mediati da recettori che dipendono da una ciliogenesi integra e dalla consegna selettiva del carico. L’alterazione di BBS4 perturba la funzione del centrosoma/corpo basale, compromette la struttura ciliare e modifica le risposte cellulari ai segnali extracellulari. Le varianti in BBS4 sono associate alla sindrome di Bardet–Biedl e ad altre ciliopatie correlate, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi che collegano la disfunzione ciliare a fenotipi dello sviluppo e metabolici.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BBS4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BBS4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BBS4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BBS4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BBS4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BBS4 per lo studio della segnalazione di BBS4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni BBS4 critici per la funzione di BBS4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BBS4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal BBS4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BBS4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BBS4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal BBS4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BBS4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BBS4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BBS4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.