Barx1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419290

Panoramica

Barx1 (BARX homeobox 1) è un fattore di trascrizione homeobox che contribuisce a regolare la definizione dei pattern embrionali e l’organogenesi nel topo, con ruoli di primo piano nello sviluppo craniofacciale e nei tessuti derivati dall’intestino anteriore. Legandosi al DNA tramite il suo homeodominio, Barx1 influenza programmi trascrizionali che coordinano le interazioni epitelio-mesenchimali, la specificazione del destino cellulare e il rimodellamento della matrice extracellulare durante la morfogenesi. L’attività di Barx1 si interseca con reti di segnalazione dello sviluppo come le vie Wnt/β-catenina e BMP, attraverso le quali può modulare gli esiti di differenziamento e la formazione dei confini tissutali. La disregolazione delle reti geniche associate a Barx1 è rilevante negli studi sulle malformazioni congenite e sui disturbi dello sviluppo che interessano le strutture facciali e gastrointestinali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Barx1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Barx1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Barx1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Barx1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Barx1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Barx1 per lo studio della segnalazione di Barx1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Barx1 critici per la funzione di Barx1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Barx1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Barx1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Barx1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Barx1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Barx1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Barx1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Barx1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Barx1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.