B7-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418032-ACT

O CD86 humano (B7-2) é uma glicoproteína de membrana do tipo I expressa principalmente em células apresentadoras de antígeno, nas quais fornece sinalização coestimuladora essencial para células T por meio da interação com CD28 e CTLA-4. Ao integrar-se à sinalização do receptor de células T, o B7-2 modula a ativação de linfócitos, a produção de citocinas e a diferenciação, moldando respostas imunes adaptativas e a tolerância periférica. O CD86 participa da formação da sinapse imune e contribui para programas transcricionais ligados a NF-κB e PI3K/AKT que governam estados de ativação tanto dos compartimentos imunes inato quanto adaptativo. A expressão desregulada de CD86 tem sido implicada em autoimunidade, inflamação crônica, biologia da rejeição a transplantes e contextos de evasão imune tumoral, tornando-o um alvo comum em imunologia e em pesquisas focadas no microambiente.

B7-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD86 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

B7-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD86 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD86, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de B7-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD86 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de B7-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via B7-2 em células tumorais com expressão de CD86 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.