Plásmido CRISPR de Activación (h) AVP Receptor V2: sc-403177-ACT

AVPR2 codifica el receptor humano 2 de vasopresina arginina (receptor V2 de AVP), un receptor acoplado a proteína G predominantemente acoplado a Gs que activa la adenilato ciclasa y eleva el cAMP intracelular. La señalización a través de cAMP/PKA regula programas de fosforilación y de tráfico intracelular que influyen en la permeabilidad al agua del epitelio y en la localización de proteínas de membrana, integrándose con procesos más amplios de desensibilización de GPCR y reciclaje endocítico. La actividad de AVPR2 es fundamental para las vías de respuesta a la vasopresina y sirve como sistema modelo para estudiar la dinámica de señalización del receptor, la regulación de segundos mensajeros y las respuestas transcripcionales dependientes de ligando. La variación genética o la expresión desregulada de AVPR2 se ha asociado con fenotipos alterados de balance hídrico y con defectos de plegamiento/tráfico del receptor, aportando vínculos mecanísticos con trastornos de la función de concentración renal.

AVP Receptor V2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AVPR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AVP Receptor V2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AVPR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AVPR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AVP Receptor V2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AVPR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AVP Receptor V2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AVP Receptor V2 en células tumorales con expresión de AVPR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.