ATP6V0E1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-411234-LAC

ATP6V0E1は、エンドメンブレン系をまたぐプロトン輸送とATP加水分解を共役させる液胞型H\+-ATPase（V-ATPase）の中核構成要素であるV0サブユニットE1をコードします。ATP6V0E1はエンドソーム、リソソーム、分泌小胞を酸性化することで、受容体介在性エンドサイトーシス、リソソーム加水分解酵素活性、タンパク質分解回転（ターンオーバー）、オートファジーを支えるとともに、ゴルジ体—エンドソームネットワーク内のpH依存的なトラフィッキングにも寄与します。V-ATPaseの機能は、リソソーム表面におけるmTORC1制御や、オルガネラの酸塩基バランスに関連したストレス応答など、栄養感知およびプロテオスタシス経路とも連動します。小胞内酸性化の異常やV-ATPaseサブユニットの攪乱は、神経変性、がん細胞の代謝・浸潤、ならびにエンドリソソーム処理に依存する免疫シグナル伝達に関連する細胞表現型と結び付けられています。

ATP6V0E1 レンチウイルス活性化粒子（h）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なATP6V0E1の発現上昇を可能にします。

ATP6V0E1 レンチウイルス活性化粒子（h）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、ATP6V0E1転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性ATP6V0E1の発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のATP6V0E1ゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。