ATP5S CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406318

概要

ATP5Sは、ミトコンドリアのF1F0 ATP合成酵素複合体（複合体V）を構成する小さな補助サブユニットの一つをコードしており、酸化的リン酸化によって生じるプロトン駆動力を利用してATP産生を触媒します。ATP5Sが適切に機能することで、ミトコンドリアのバイオエネルギー維持、膜電位の維持、さらにアポトーシスや活性酸素種（ROS）恒常性といった過程と細胞エネルギー代謝の協調が支えられます。ATP合成酵素の組み立てや複合体V活性の破綻はミトコンドリア機能障害と関連しており、これは神経筋・神経変性の表現型から腫瘍における代謝リモデリングに至るまで、さまざまな病態で共通して観察される特徴です。そのためATP5Sは、ミトコンドリア呼吸、エネルギーストレス応答、ならびに細胞運命決定に影響するミトコンドリアシグナル伝達経路の研究において重要です。

ATP5S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるATP5S遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ATP5S内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ATP5Sのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATP5Sタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATP5Sシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ATP5S欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATP5Sの機能に不可欠なATP5Sエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ATP5Sゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATP5S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびATP5S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ATP5S遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATP5S HDRプラスミド（h）および ATP5S HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはATP5Sホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のATP5S標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。