Plásmido Doble Nickase (h) ATF4: sc-400155-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ATF4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ATF4 (h) y el plásmido de doble nickasa ATF4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATF4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATF4 Anticuerpo (B-3): sc-390063
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ATF4 | sc-400155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ATF4 | sc-400155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El factor de transcripción activador 4 (ATF4) es un factor de transcripción bZIP sensible al estrés que coordina programas adaptativos de expresión génica durante la respuesta integrada al estrés (ISR). ATF4 se traduce de forma preferente tras la fosforilación de eIF2α aguas abajo de PERK, GCN2, PKR y HRI, impulsando redes transcripcionales que regulan el metabolismo de aminoácidos, la homeostasis redox, la autofagia y la apoptosis mediante dianas implicadas en la síntesis de glutatión, el metabolismo de un carbono y la proteostasis. Interactúa con las vías de estrés del retículo endoplásmico (RE) y de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), incluida la cooperación con CHOP/DDIT3, para modular decisiones sobre el destino celular bajo estrés proteotóxico o por limitación de nutrientes. La actividad desregulada de ATF4 se ha implicado en la supervivencia de células cancerosas bajo hipoxia y escasez de nutrientes, en la neurodegeneración y trastornos de la proteostasis, y en estados metabólicos e inflamatorios en los que se altera el control transcripcional adaptativo al estrés.
ATF4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATF4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATF4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATF4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATF4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.