Ataxin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403309-ACT

ATXN1 codifica a ataxina-1, uma proteína predominantemente nuclear que participa na regulação transcricional e em processos associados ao RNA por meio de interações com a cromatina e com parceiros de ligação ao RNA. A ataxina-1 contribui para programas de expressão génica neuronais e do desenvolvimento e está ligada a vias de homeostase proteica, incluindo a degradação dependente de ubiquitina e a compartimentalização subnuclear. Alterações na dose ou na função de ATXN1 podem perturbar redes transcricionais e respostas ao stress celular, e o gene é amplamente estudado no contexto da neurodegeneração, em particular na ataxia espinocerebelar associada a poliglutaminas. Em modelos celulares humanos, ATXN1 serve como um nó acessível para dissecar circuitos de regulação génica, mecanismos de proteostase e vulnerabilidade específica de tipos celulares.

Ataxin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATXN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ataxin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATXN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATXN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ataxin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATXN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ataxin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ataxin-1 em células tumorais com expressão de ATXN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.