ASPP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404330-ACT

PPP1R13B は、p53 ファミリーのメンバーに結合して、アポトーシス、細胞周期停止、細胞ストレス応答を制御する転写プログラムを調節するプロリンに富む制御因子 ASPP1 をコードします。ASPP1 は DNA 損傷シグナル伝達とクロマチン関連の転写制御の接点で機能し、生存とプログラム細胞死のバランスに影響を与えます。PPP1R13B の発現変化や ASPP1 を介した調節異常は、多様ながん関連の状況で観察される p53 経路活性の破綻や、アポトーシス制御の障害を伴う他の疾患とも関連づけられています。そのため PPP1R13B/ASPP1 は、遺伝毒性ストレス、腫瘍抑制ネットワーク、転写リモデリングを結び付ける経路の研究でしばしば解析対象となっています。

ASPP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP1R13Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ASPP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP1R13B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP1R13B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ASPP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP1R13B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるASPP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP1R13B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるASPP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。