ASIC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401452

概要

ASIC1（酸感受性イオンチャネルサブユニット1）は、DEG/ENaCファミリーに属する、プロトンによって開口し電位には非感受性のカチオンチャネルをコードしています。このチャネルは細胞外の酸性化に応答して開き、Na⁺の流入を可能にして膜興奮性を調節します。ASIC1はシナプス伝達、神経可塑性、pH依存性シグナル伝達に関与し、興奮性細胞においてCa²⁺依存性経路や活動依存的な遺伝子プログラムと連携して機能します。ASIC1活性の変化は、虚血や神経変性の状況に関連する神経炎症や興奮毒性ストレス応答と結び付けられており、痛みに関連する感覚処理においても研究されています。これらの特性により、ヒトASIC1は、酸感受性機構、イオン恒常性、刺激に連動したシグナル伝達ネットワークを解明するための有用な標的となっています。

ASIC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるASIC1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ASIC1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ASIC1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ASIC1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ASIC1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ASIC1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ASIC1の機能に不可欠なASIC1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ASIC1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ASIC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびASIC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ASIC1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ASIC1 HDRプラスミド（h）および ASIC1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはASIC1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のASIC1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。