ASH2L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423846

Panoramica

Ash2l codifica ASH2L, un componente centrale dei complessi metiltransferasici SET1/MLL per l’istone H3K4, che regolano lo stato della cromatina e i programmi trascrizionali. Attraverso il controllo della metilazione di H3K4, ASH2L contribuisce all’espressione genica dipendente dalla RNA polimerasi II, all’attività degli enhancer e al mantenimento epigenetico dell’identità cellulare durante lo sviluppo e la differenziazione. La regolazione della cromatina dipendente da ASH2L si interseca con vie che governano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la specificazione di linea, rendendola rilevante per studi sulla biologia delle cellule staminali e sull’ematopoiesi. Un’alterata regolazione di ASH2L o dell’attività dei complessi MLL/SET1 è stata implicata in stati trascrizionali oncogenici e in anomalie dello sviluppo, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in modelli di malattia incentrati sull’epigenetica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ASH2L (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ash2l in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ash2l insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ash2l a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ASH2L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ash2l per lo studio della segnalazione di ASH2L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ash2l critici per la funzione di ASH2L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ash2l per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ASH2L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ASH2L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ash2l. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ASH2L Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ASH2L (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ash2l per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ash2l definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.