Plasmide Double Nickase (h) ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1: sc-400429-NIC

ASGR1 code la sous-unité principale du récepteur hépatique des asialoglycoprotéines (ASGPR1), une lectine de type C exprimée majoritairement à la surface des hépatocytes, qui reconnaît les glycoprotéines désialylées portant un galactose terminal ou une N‑acétylgalactosamine. Après liaison du ligand, ASGPR1 médiatise une endocytose dépendante de la clathrine et l’acheminement vers des compartiments endo‑lysosomaux, contribuant à l’élimination des glycoprotéines et à la régulation homéostatique des protéines circulantes. Ce récepteur participe à la reconnaissance des glucides et aux processus de transport vésiculaire, en interaction avec des voies métaboliques spécifiques du foie et la dynamique de recyclage des récepteurs. Des altérations de la fonction ou de l’expression d’ASGR1 sont fréquemment étudiées dans des contextes de dysfonction hépatique et de métabolisme lipidique, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du foie.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ASGR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ASGR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ASGR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ASGR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.