ARSA Double Nickaseプラスミド (h): sc-404921-NIC

ヒトARSA（アリールスルファターゼA）はリソソーム局在性のスルファターゼであり、セレブロシド3-硫酸（スルファチド）を加水分解することで、スフィンゴ脂質の代謝回転とミエリン脂質の恒常性を維持します。ARSAはリソソームの分解経路およびエンドリソソーム輸送と連動して膜組成の調節に関与し、神経細胞やグリア細胞におけるスルファチドの蓄積を防ぎます。ARSA活性の喪失は、メタクロマチック白質ジストロフィーで見られるリソソーム機能障害や脱髄病理と関連しており、ARSAはリソソーム蓄積症の生物学や神経変性に伴う脂質調節異常を研究するうえで広く用いられる重要な標的です。ARSAの攪乱はまた、スフィンゴ脂質代謝産物が炎症、細胞ストレス応答、神経細胞の生存能に与える影響を検討する際にも有用です。

ARSA ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ASNA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ASNA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ASNA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ASNA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。