Particules Lentivirales d'Activation (h) ARP-1: sc-405241-LAC

NR2F2 code pour ARP-1 (également connu sous le nom de COUP-TFII), un récepteur nucléaire orphelin qui agit comme un facteur de transcription spécifique de séquence, gouvernant les décisions de destin cellulaire et des programmes géniques propres aux tissus. ARP-1 s’intègre à la signalisation des récepteurs nucléaires afin de moduler l’activité des enhancers et des promoteurs, influençant des processus tels que l’angiogenèse, le développement des organes, la régulation métabolique et les transitions épithélio-mésenchymateuses. Par un contrôle transcriptionnel dépendant du contexte, NR2F2 participe à des voies qui façonnent la biologie vasculaire et la mise en place des patrons du développement, et a été associé dans la littérature à des anomalies congénitales ainsi qu’à des états de différenciation dérégulés pertinents pour la biologie du cancer. Ces caractéristiques font de NR2F2 un nœud utile pour étudier les réseaux transcriptionnels, l’expression génique régulée par la chromatine et la spécification de lignage dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ARP-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NR2F2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ARP-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NR2F2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ARP-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NR2F2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.