Partículas Lentivirales de Activación (h) ARID1B: sc-402365-LAC

ARID1B codifica una subunidad central del complejo de remodelación de la cromatina SWI/SNF (BAF) dependiente de ATP, que regula el posicionamiento de los nucleosomas y la accesibilidad de la cromatina para controlar programas transcripcionales. Mediante la remodelación de la arquitectura de potenciadores y promotores, ARID1B influye en la especificación de linajes, la progresión del ciclo celular y las redes de respuesta al daño del ADN, integrando señales a lo largo de vías de desarrollo y diferenciación. La actividad alterada de ARID1B perturba la regulación epigenética y la ocupación por factores de transcripción, lo que afecta la identidad celular y el mantenimiento del estado de la cromatina. La disrupción genética o la desregulación de ARID1B se ha vinculado con fenotipos del neurodesarrollo y con defectos de remodelación de la cromatina asociados al cáncer, lo que lo convierte en un nodo ampliamente estudiado en la investigación centrada en la transcripción y el epigenoma.

Las partículas de activación lentiviral ARID1B (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ARID1B en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ARID1B (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ARID1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ARID1B. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ARID1B y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.