ARID1A Double Nickaseプラスミド (m): sc-430047-NIC

マウスのArid1aは、転写プログラムを制御するためにヌクレオソームの配置を調節する、SWI/SNF（BAF）ATP依存性クロマチンリモデリング複合体のDNA結合性サブユニットであるARID1Aをコードする。ARID1Aはエンハンサーおよびプロモーターのアクセシビリティの協調を助け、クロマチン構造への広範な影響を介して、細胞周期制御、系譜指定、DNA損傷応答、ゲノム安定性に影響を及ぼす。哺乳類の系では、ARID1A機能の変化はエピジェネティック制御の破綻や分化不全と強く関連しており、増殖やストレス応答シグナルにおけるクロマチン駆動性の変化を研究する上で重要な結節点となる。そのためArid1aは、クロマチンリモデリング経路と、それらが疾患関連の細胞表現型に果たす役割を解析するためのマウスモデルで広く用いられている。

ARID1A ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Arid1a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Arid1a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Arid1aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Arid1aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。