Plásmido CRISPR de Activación (m) ARH2: sc-433335-ACT

El gen murino *Adprhl1* codifica ARH2, un miembro de la familia de hidrolasas tipo ADP-ribosilo implicada en la regulación de la dinámica de la mono-ADP-ribosilación y de señales relacionadas con el recambio proteico. Aunque la actividad enzimática de algunos miembros de esta familia puede ser atípica, ARH2 se estudia por sus contribuciones a las respuestas al estrés celular, el control metabólico y procesos de señalización que convergen con el manejo del daño en el ADN y la homeostasis redox. En modelos de biología cardíaca y muscular, la expresión de *Adprhl1* se ha asociado con la organización miofibrilar y programas del desarrollo, lo que la hace relevante para investigar vías vinculadas a cardiomiopatías y mecanismos de remodelación tisular. Estas propiedades sitúan a ARH2 como un nodo útil para analizar cómo la señalización asociada al ADP-ribosa se integra con la fisiología específica de cada órgano.

ARH2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Adprhl1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ARH2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Adprhl1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Adprhl1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ARH2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Adprhl1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ARH2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ARH2 en células tumorales con expresión de Adprhl1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.