Arc Lentiviral Activation Particles (m): sc-419184-LAC

Das aktivitätsregulierte, zytoskelettassoziierte Protein Arc (Activity-regulated cytoskeleton-associated protein, Arc) ist das Produkt eines Immediate-Early-Gens, das neuronale Aktivität mit synaptischem Umbau und langfristiger Plastizität koppelt. Arc ist an postsynaptischer Signalübertragung und endozytotischem Transport beteiligt, einschließlich der Regulation der Internalisierung von AMPA-Rezeptoren und der homöostatischen synaptischen Skalierung, und verknüpft damit calciumabhängige transkriptionelle Programme mit strukturellen Veränderungen an exzitatorischen Synapsen. Durch diese Funktionen steht Arc im Zentrum von Lern- und Gedächtnis-relevanten Signalwegen sowie der erfahrungsabhängigen Verfeinerung neuronaler Schaltkreise. Eine dysregulierte Arc-Expression oder -Signalübertragung wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter veränderte synaptische Konnektivität und kognitive Dysfunktionen in krankheitsrelevanten Modellen.

Arc Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Arc-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Arc Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Arc-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Arc-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Arc-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.