Plásmido Doble Nickase (m) APPL1: sc-428481-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)APPL1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa APPL1 (m) y el plásmido de doble nickasa APPL1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Appl1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: APPL1 Anticuerpo (A-1): sc-271901
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) APPL1 | sc-428481-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) APPL1 | sc-428481-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Appl1 codifica APPL1, una proteína adaptadora endosomal que se une a Rab5 e integra la señalización de los receptores tirosina cinasa con las vías downstream de PI3K–AKT y MAPK. Mediante interacciones con los receptores de adiponectina y componentes de la señalización de la insulina, APPL1 contribuye a la regulación de la captación de glucosa, el metabolismo lipídico y las respuestas de crecimiento celular. APPL1 también participa en el tráfico endocítico y la compartimentalización de la señal, influyendo en programas de supervivencia, migración y señalización neuronal. La señalización asociada a APPL1 desregulada se ha relacionado en la literatura con fenotipos metabólicos y respuestas alteradas a factores de crecimiento, lo que respalda su relevancia en estudios sobre resistencia a la insulina, vías vinculadas a la obesidad y mecanismos de enfermedad impulsados por la señalización.
APPL1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Appl1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Appl1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Appl1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Appl1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.