APP/Amyloid Precursor Protein Double Nickase Plasmid (m): sc-419170-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das APP/Amyloid Precursor Protein Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- APP/Amyloid Precursor Protein Double-Nickase-Plasmid (m) und APP/Amyloid Precursor Protein Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf App abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: β-Amyloid: sc-28365
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
APP/Amyloid Precursor Protein Double Nickase Plasmid (m) | sc-419170-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APP/Amyloid Precursor Protein Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419170-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *App* kodiert das Amyloid-Vorläuferprotein (APP), ein Typ-I-Transmembran-Glykoprotein, das durch das sekretorische und endozytotische System transportiert wird und dort das Auswachsen von Neuriten, die Synapsenbildung sowie die intrazelluläre Signalübertragung unterstützt. APP wird proteolytisch durch α-, β- und γ‑Sekretasen verarbeitet, wodurch es mit der regulierten intramembranären Proteolyse und der Entstehung bioaktiver Fragmente verknüpft ist, die die neuronale Homöostase beeinflussen. Seine Prozessierung steht in Wechselwirkung mit Membrantransport, der Organisation von Lipid-Rafts und calciumabhängigen Signalwegen und wird häufig im Kontext neurodegenerativer Prozesse untersucht. Eine fehlregulierte APP-Spaltung und eine veränderte Fragmentbildung sind zentrale Themen der mechanistischen Forschung zur Amyloidbiologie, Neuroinflammation und synaptischen Dysfunktion in Alzheimer-Modellen.
APP/Amyloid Precursor Protein Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des App-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von App abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die App-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit App-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.