Plásmido CRISPR de Activación (h) Apolipoprotein A I/APOA1: sc-400499-ACT

APOA1 codifica la apolipoproteína A-I, el principal componente proteico de las partículas de lipoproteína de alta densidad (HDL) y un mediador central de la homeostasis del colesterol. La ApoA-I promueve el eflujo de colesterol y fosfolípidos dependiente de transportadores de la familia ABC (en particular a través de ABCA1 y ABCG1), favorece la biogénesis de HDL naciente y participa en el transporte reverso de colesterol hacia el hígado. Mediante interacciones con la lecitina–colesterol aciltransferasa (LCAT) y las vías de remodelado de HDL, APOA1 influye en la maduración de las lipoproteínas y en el tráfico sistémico de lípidos. La desregulación de la expresión o la función de APOA1 se asocia con un metabolismo alterado de HDL y se estudia ampliamente en el contexto de la biología de la aterosclerosis, las respuestas inflamatorias y los mecanismos de las enfermedades metabólicas.

Apolipoprotein A I/APOA1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de APOA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Apolipoprotein A I/APOA1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus APOA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional APOA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Apolipoprotein A I/APOA1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo APOA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Apolipoprotein A I/APOA1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Apolipoprotein A I/APOA1 en células tumorales con expresión de APOA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.