API5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406608

Panoramica

API5 (inibitore dell’apoptosi 5) codifica una proteina nucleare che contribuisce alla sopravvivenza cellulare modulando la segnalazione apoptotica e sostenendo la tolleranza allo stress cellulare. API5 è stata associata alla regolazione di programmi trascrizionali dipendenti da E2F, alla progressione del ciclo cellulare e al mantenimento della capacità proliferativa, con interazioni riportate che influenzano processi associati alla cromatina. L’alterazione dell’espressione di API5 è spesso studiata nel contesto di fenotipi oncogeni, inclusi un’aumentata resistenza all’apoptosi e cambiamenti nel controllo della crescita. Di conseguenza, API5 è un bersaglio utile per analizzare i meccanismi della segnalazione di sopravvivenza, della regolazione trascrizionale e delle transizioni dello stato cellulare associate ai tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO API5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene API5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del API5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto API5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina API5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di API5 per lo studio della segnalazione di API5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni API5 critici per la funzione di API5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di API5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal API5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal API5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus API5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal API5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR API5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia API5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio API5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.