APEG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419147

概要

Spegは、横紋筋で高発現するセリン/スレオニンタンパク質キナーゼであるAPEG1をコードしており、細胞骨格の構築や興奮収縮連関に関与するとされています。APEG1は筋原線維の完全性およびトライアド／接合部膜の恒常性と関連し、キナーゼシグナル伝達をサルコメア形成や心筋細胞・骨格筋線維におけるカルシウム制御過程と結び付けています。Speg依存性経路の破綻は筋の発生や収縮機能の異常と関連付けられており、マウスモデルにおける心筋症やミオパチー表現型の基盤となる機序の研究において重要です。

APEG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSpeg遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Speg内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Spegのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、APEG1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、APEG1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Speg欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• APEG1の機能に不可欠なSpegエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Spegゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• APEG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAPEG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Speg遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  APEG1 HDRプラスミド（m）および APEG1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSpegホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSpeg標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。