ANT1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400679-NIC

SLC25A4は、アデニンヌクレオチドトランスロカーゼ1（ANT1）をコードしています。ANT1はミトコンドリア内膜に存在するキャリアで、ミトコンドリア膜を介してADPとATPを交換し、酸化的リン酸化を細胞質側のエネルギー需要と結び付けます。ANT1はミトコンドリアのバイオエネルギー機能に不可欠であり、膜電位の維持や透過性遷移、アポトーシスの制御にも関与することから、ストレス応答やミトコンドリアの品質管理とも関連します。ANT1機能の変化は、ミトコンドリアミオパチーや心筋症関連経路などを含む神経筋・代謝系の表現型と関連付けられており、組織特異的なエネルギー代謝を研究する上で重要な標的となっています。ヒト細胞では、ANT1はレドックスバランスや活性酸素種（ROS）シグナル伝達を形成する、より広範なミトコンドリアキャリアネットワークとも相互作用します。

ANT1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SLC25A4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SLC25A4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SLC25A4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SLC25A4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。