Anillin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403342-ACT

ANLN kodiert Anillin, ein konserviertes Gerüstprotein, das an F‑Aktin und Myosin II bindet und die Assemblierung des kontraktilen Rings, das Einschnüren der Teilungsfurche (Cleavage Furrow) sowie den Abschluss der Zytokinese koordiniert. Anillin integriert Signale aus der durch RhoA/ROCK regulierten Aktomyosin-Dynamik mit der Organisation von Septinen und dem Umbau der Membran‑Zytoskelett‑Struktur, um eine korrekte Chromosomensegregation und Zellteilung sicherzustellen. Eine fehlregulierte ANLN-Expression steht mit aberranter Proliferation, genomischer Instabilität und veränderter Zellzyklus-Kontrolle in Zusammenhang, weshalb ANLN in Studien zur Tumorbiologie und zur mitotischen Genauigkeit häufig als Marker verwendet wird. Als Organisator des Zytoskeletts unterstützt Anillin zudem Untersuchungen zur kortikalen Spannung, zum Zellabrunden (Cell Rounding) und zur Architektur epithelialer Gewebe.

Anillin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANLN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Anillin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANLN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANLN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Anillin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANLN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Anillin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Anillin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANLN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.