Partículas Lentivirales de Activación (h) AMPKβ2: sc-403537-LAC

PRKAB2 codifica la subunidad reguladora β2 de la proteína cinasa activada por AMP (AMPK), un complejo central de detección energética que integra el estado celular de ATP/AMP para coordinar la homeostasis metabólica. AMPKβ2 ayuda a ensamblar (“scaffold”) la cinasa heterotrimérica y contribuye a la selección de sustratos y a la estabilidad del complejo, influyendo así en programas posteriores como la oxidación de ácidos grasos, la captación de glucosa, la autofagia y la inhibición de la señalización anabólica a través de vías que incluyen mTOR. En tejidos humanos, la señalización de AMPK se interrelaciona con la función mitocondrial y las respuestas al estrés, lo que vincula la regulación de PRKAB2 con fenotipos relevantes para la adaptación metabólica y la supervivencia celular bajo limitación de nutrientes. La alteración de la actividad de la vía de AMPK se ha estudiado en contextos como la resistencia a la insulina, la disfunción metabólica asociada a la obesidad y la reprogramación metabólica de células tumorales, lo que respalda a PRKAB2 como un nodo mecanístico en la investigación de la homeostasis energética.

Las partículas de activación lentiviral AMPKβ2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRKAB2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral AMPKβ2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRKAB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de AMPKβ2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRKAB2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.