ALX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419095

Übersicht

Alx4 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor ALX4, einen nukleären Regulator von entwicklungsbezogenen Genexpressionsprogrammen, die die kraniofaziale Musterbildung, die Morphogenese von Gliedmaßen und Skelett sowie die mesenchymale Differenzierung prägen. ALX4 beeinflusst transkriptionelle Netzwerke, die Proliferation und Positionsidentität steuern, und überschneidet sich mit Signalwegen, die an der osteogenen Linienfestlegung und der Bildung von Gewebegrenzen beteiligt sind. In Mausmodellen ist eine veränderte Alx4-Funktion mit Defekten in der Entwicklung des Schädeldachs, kraniofazialen Fehlbildungen und Störungen der Finger-/Zehenmusterung assoziiert, was seine Eignung als Knotenpunkt für die Erforschung kongenitaler Morphogenese unterstreicht. Diese Eigenschaften machen ALX4 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung genregulatorischer Schaltkreise, die der Skelettentwicklung und verwandten Entwicklungsphänotypen zugrunde liegen.

Das ALX4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Alx4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Alx4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Alx4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ALX4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Alx4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ALX4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Alx4-Exone abzielen, die für die ALX4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Alx4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ALX4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ALX4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Alx4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ALX4 HDR-Plasmid (m) und ALX4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Alx4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Alx4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.