ALX4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419095

Panoramica

Alx4 codifica il fattore di trascrizione homeobox ALX4, un regolatore nucleare dei programmi di espressione genica dello sviluppo che modellano il patterning craniofacciale, la morfogenesi degli arti e dello scheletro e la differenziazione mesenchimale. ALX4 influenza le reti trascrizionali che controllano la proliferazione e l’identità posizionale, intersecandosi con vie coinvolte nell’impegno della linea osteogenica e nella formazione dei confini tissutali. Nei modelli murini, un’alterazione della funzione di Alx4 è associata a difetti nello sviluppo della volta cranica, malformazioni craniofacciali e anomalie nel patterning delle dita, a supporto della sua utilità come nodo per lo studio della morfogenesi congenita. Queste proprietà rendono ALX4 un bersaglio rilevante per indagare i circuiti di regolazione genica alla base dello sviluppo scheletrico e dei fenotipi dello sviluppo correlati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ALX4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Alx4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Alx4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Alx4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ALX4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Alx4 per lo studio della segnalazione di ALX4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Alx4 critici per la funzione di ALX4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Alx4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ALX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ALX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Alx4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ALX4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ALX4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Alx4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Alx4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.